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荧光定量PCR,你了解多少

点击次数:328  发布时间:2020-11-25
       实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法,通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
技术原理:
       实时荧光定量PCR,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。将已知浓度的标准品梯度稀释进行Real Time PCR,按照起始DNA量由多到少的顺序等间隔得到一系列扩增曲线。Ct值与起始模板数的对数值之间存在线性关系,可以制作标准曲线。未知浓度的样品也得到Ct值,代入标准曲线,就可以求出未知样品的起始模板量。
       PHS智能荧光定量PCR仪主要用于基因扩增检测,通过在PCR反应体系中加入荧光染料或探针等试剂,荧光型号不断累积实现实时监测PCR扩增反应全过程,通过Ct值和标准曲线,终达到检测目标基因的目的。用于基因定性定量分析,基因检测,基因分型,SNP分析(单核苷酸的多态性),RFLP多态性分析(限制性片段长度多态性),基因表达研究,高通量基因表达谱研究,以及STR鉴定等检测。
 
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