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荧光定量PCR仪每个循环包括这三个关键步骤

点击次数:807  发布时间:2022-03-02
  荧光定量PCR仪是功能强大的定量PCR平台,可提供可靠的性能、灵活性和可扩展性,可满足临床诊断实验室不断变化的需求。它兼容多种快速更换模块,如96孔、96孔快速、384孔以及不同通量的微阵列芯片反应模块,让用户可以随意选择实验通量方案。
  荧光检测采用PMT传感器,灵敏度高,光谱带宽大,功能强大,具有定性、定量、基因变异、基因表达、熔解曲线等分析功能。仪器控温性能,升温速率≥5.0℃/s,可实现单份检测,检测动态范围100~1010份。荧光定量PCR仪无边缘效应,无光路校正,顶部激发/检测,非接触式测量,试剂适应性强,全面的自诊断和自检测功能,使用维护方便,长寿命LED光源,稳定的发射波长和免维护。
  荧光定量PCR仪每个循环包括这三个关键步骤。通常,它运行40个周期。
  1、幼化:双链DNA通过高温孵育“溶解”成多肽链,单链DNA的二级结构松动。一般DNA聚合酶可以承受较大的温度(一般为95℃)。如果免费模板的GC含量高,时间会有所提高。
  2、热处理:在整个热处理过程中,与开放阅读框的紧密接触有机会引起杂交杂交。因此,解链温度(TM)应根据计算个人所得税的引物设计,并选用合适的温度(一般比引物设计的TM低5℃)。
  3、扩宽:70-72℃中间,DNA聚合酶活性为,引物加宽速度可达每秒100个碱基。随即,荧光定量PCR中扩增的精彩画面就小了。通常,该步骤与温度为60°C的热处理步骤相结合。使用随机引物设计或寡核苷酸(DT)和随机引物设计化学品。用于cDNA转化的温度取决于所选的RT酶。逆转录后,将约10%的cDNA转移到单独的试管中进行及时的荧光定量PCR。
 
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